Question

Como efetuar titulação de partículas lentivirais para transdução celular?

Answer 1

O protocolo a seguir é bastante completo. Em Fevereiro de 2020 efetuamos síntese dos primers sugeridos para tentarmos padronizar essa abordagem de quantificação de partículas lentivirais.

Kutner RH, Zhang X-Y, Reiser J. Production, concentration and titration of pseudotyped HIV-1-based lentiviral vectors. Nat Protoc 4:495–505, 2009. DOI:10/d9jcnw | PMID: 19300443.

Oligonucleotídeos necessários para quantificação lentiviral:

PMID19300443_GAG.F - TTCGCAGTTAATCCTGGCCTT
PMID19300443_GAG.R - GCACACAATAGAGGACTGCTATTGTA
PMID19300443_WPRE.F - CCTTTCCGGGACTTTCGCTTT
PMID19300443_WPRE.R - GCAGAATCCAGGTGGCAACA

Answer 2

Vide http://lentilab.unige.ch/qpcrtitration.html (Dr Patrick SALMON @ Department of Neurosciences - Faculty of Medicine - University of Geneva. Versão em PDF no Labdocs, neste link

Answer 3

Artigo relevante: Barczak W, Suchorska W, Rubiś B, Kulcenty K. Universal real-time PCR-based assay for lentiviral titration. Mol Biotechnol. 2015 Feb;57(2):195-200. [PMID: 25370825]

Answer 4

Outro artigo relevante: Jiang W, Hua R, Wei M, Li C, Qiu Z, Yang X, et al. An optimized method for high-titer lentivirus preparations without ultracentrifugation. Scientific Reports 5:13875, 2015. DOI:10.1038/srep13875

Nesse trabalho utilizam kit para titulação (GeneCopoeia TM, Cat. No. HPR-LTK-050. Vide manual neste link).