O potencial de clonogênese das células pode ser efetuado conforme indicado nos trabalhos a seguir:
- Franken NA, Rodermond HM, Stap J, Haveman J, van Bree C. Clonogenic assay of cells in vitro. Nat Protoc. 2006;1(5):2315-9. PubMed PMID: 17406473.
- Rafehi H, Orlowski C, Georgiadis GT, Ververis K, El-Osta A, Karagiannis TC. Clonogenic assay: adherent cells. J Vis Exp. 2011 Mar 13;(49). pii: 2573. doi: 10.3791/2573. PubMed PMID: 21445039
Por outro lado, para estimar com mais propriedade a transformação celular, é recomendável experimento de crescimento independente de ancoragem em meio semi-sólido (Soft Agar Assay; Anchorage-independent cell growth assay). Desse modo pode-se avaliar a formação de colônias que subverteram a morte celular por falta de ancoragem (i.e., anoiquise), propriedade importante de células epiteliais transformadas.
Protocolo sugerido para experimento em meio semi-sólido (mais apropriado para transformação celular de células epiteliais!): - Borowicz S, Van Scoyk M, Avasarala S, Karuppusamy Rathinam MK, Tauler J, Bikkavilli RK, Winn RA. The soft agar colony formation assay. J Vis Exp. 2014 Oct 27;(92):e51998. doi: 10.3791/51998. PubMed PMID: 25408172. Vide vídeo em PMC4353381. Download (27M, mp4)
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